猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘正奎 吴瑗 周莹姗 孙静 宋厚辉 巴少波 王晓杜 王磊 石林 邵春艳 陈琳
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 动物学 猪圆环病毒2型 实时荧光定量PCR 灵敏性 特异性 检测方法
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 页码范围: 1133-1138
• 页数: 6页
• 分类号: S852.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.2018.06.018

摘要

猪圆环病毒2型(PCV2)是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、 免疫抑制、 皮肤肾病综合征等疾病的病原体.根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,并将目的片段克隆至pMD18-T载体,构建阳性标准品.以阳性标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立标准曲线,进行灵敏性、 重复性和特异性验证,并应用此方法对临床样品进行检测.结果表明:阳性质粒标准品构建成功,该检测方法的引物与探针的最佳浓度皆为0.2μmol·L-1,线性检测范围为2.1×1013～2.1×106拷贝·L-1,最低检测限值为8.828×106拷贝·L-1,且与其他相关疾病无交叉反应;各批次检测变异系数低,检测方法稳定性好.本研究建立的敏感性高、 特异性好的实时荧光定量PCR方法,为PCV2的快速检测提供了新工具.图6表3参15