猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR的建立与应用

• 作者: 姚俊
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 TaqMan实时荧光定量PCR 建立 应用
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 68-76
• 页数: 9页
• 分类号: S852.651
• 字数: 7167字
• 语种: 中文

摘要

为了建立一种既能检测野毒,又能检测疫苗毒的猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法,经过对GenBank中所有瘟病毒属成员高度保守的5＇端非翻译区序列比对分析后,设计出1对TaqMan Real-time RT-PCR引物、1条TaqMan探针和3条RNA标准品制备引物。猪瘟病毒石门毒株经RNA标准品制备引物RT-PCR扩增后,再经T7 RNA聚合酶体外转录制备包含检测目的片断序列的猪瘟病毒RNA标准品。通过最佳引物、探针浓度的筛选及反应条件的优化,建立了猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法批内及批间重复试验变异系数均低于2%,特异性试验仅能检测出猪瘟强毒及疫苗毒株,最低浓度检测极限为1 X 102 copies/μL,上机检测时间少于60 min,建立的标准曲线斜率（Slope）为：-3.97,截距（Intercept）为：47.41,相关系数（R2）为：0.999779。运用该方法对3份猪瘟临床组织样品及6家企业生产的5种细胞苗及2种脾淋苗进行定量检测,结果提示：临床病料含有的病毒拷贝数差异不大,而疫苗产品每头份含有的病毒拷贝数差异较大。所建立的方法具有特异、快速、灵敏、可重复性和线性关系好的特点,不仅适合于猪瘟临床样品的早期检测,也适用于疫苗生产过程中的质控及疫苗制品的效价评估。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚俊	云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室	27	126	7.0	9.0