非洲猪瘟病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 李维彬 王玉炯 蒋正军 许崇波 郑增忍 郭福生 龚振华
• 来源期刊: 宁夏大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟 TagMan探针 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究专题
• 页码范围: 56-59
• 页数: 4页
• 分类号: S854.57|S852.695.5
• 字数: 3045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-2328.2007.01.016

摘要

为建立一种快速、准确、特异的非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)定量检测方法,根据TaqMan探针荧光定量分析原理,对ASFV核酸进行了实时荧光定量PCR分析.借助计算机软件辅助,对ASFV基因序列及检测引物和探针进行了优化筛选,利用pET-ASFVP72质粒作为参比模板对PCR反应的Mg2+、引物、探针浓度等参数进行了优化,其最佳浓度分别为4.5 mmol/L,400 nnol/L和500 nmol/L.同时,对灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评估,最低检出量为102个拷贝数的质粒,特异性为100%,CT(Cycle Threshold)值的变异系数CV小于5%.对送检的15份(是否感染ASFV不确定)猪肉样品进行检测,结果全为阴性.试验表明,所建立的实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异、灵敏地对ASFV核酸进行定量分析,从而为非洲猪瘟的检测提供了一个新的、可靠的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玉炯	宁夏大学生命科学学院	108	671	13.0	20.0
2	许崇波	宁夏大学生命科学学院	25	219	8.0	13.0