一种基于CP204L基因的非洲猪瘟病毒Taq Man-MGB实时荧光PCR检测方法的建立

• 作者: 张俊哲 王乃福 王建华 王玉玲 肖妍 董志珍 赵丹 赵祥平 陈小金
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 CP204L序列 TaqMan-MGB探针 实时荧光PCR
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 23-25
• 页数: 3页
• 分类号: S852.65+1
• 语种: 中文

摘要

基于非洲猪瘟病毒(ASFV) CP204L基因序列设计1对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种检测ASFV的TaqMan-MGB实时荧光PCR方法.结果显示,该方法仅对ASFVDNA呈现特异性扩增,不与猪的其他常见病毒发生交叉反应,具有良好的特异性.该方法对标准对照质粒(PCR2.1-CP204L)的线性检测范围为4.2 ×101 ～4.2×109 copies/pL,标准曲线方程为Y=-3.452 3X +39.014,相关系数(R2)为0.998 8,检测下线为4.2个拷贝.对5个不同浓度(4.2×103 ～4.2×107 copies/μL)的质粒标准品进行4次双份样品的重复检测,Ct值变异系数均小于1.5％,表明该方法具有良好的重现性.用该方法对总计164份的进口猪临床样品和生猪肌肉样品进行ASFV检测,结果均为阴性.该方法的建立为活猪临床样品和生猪肌肉样品中ASFV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段.