猪瘟病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究

• 作者: 张改平 张雨杭 李存法 李金磊 李青梅 王丽 王瑞宁 赵孟孟 郭军庆
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 猪瘟病毒 荧光定量PCR PK-15细胞上清 增殖规律 TCID5o
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 32-36,封2
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65+1
• 语种: 中文

摘要

为了了解猪瘟病毒(CSFV)在PK-15细胞上的增殖规律.根据GenBank中CSFV Shimen毒株的NS5A基因保守区域序列,设计1对特异性引物,以CSFV总RNA为反转录模板,经优化反应条件,建立了基于实时荧光定量PCR技术的CSFV检测方法,并对其进行了敏感性、特异性、重复性试验,结果显示,该方法重复性好、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,并且CSFV的最低检测限为1TCID50/mL.利用所建立的方法研究CSFV在PK-15细胞上清中的增殖动态,并与TCID5o方法绘制的复制动态曲线进行比较.结果 显示,两种方法测定的CSFV在PK-15细胞上的复制动态具有一定的平行关系,该方法为研究猪瘟病毒的致病机理及利用体外细胞培养毒生产疫苗提供了试验依据.