非洲猪瘟病毒TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法建立

• 作者: 于婉琪 任名 孙海伟 牛婷婷 邬静 陈鸿军
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 TaqMan 荧光定量PCR 分子诊断
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 42-48
• 页数: 7页
• 分类号: S852.651
• 字数: 4165字
• 语种: 中文

摘要

为建立一种快速、准确的非洲猪瘟病毒(ASFV)分子检测方法,以2018年8月分离的SY18毒株P72基因序列(GenBank登录号:MH713612.1)为参考毒株,人工合成质粒标准品,命名为pcDNA3-P72,基于该毒株P72基因序列,在1627～1876 bp处设计一对特异性引物和TaqMan探针,优化反应体系及条件,本研究成功建立了基于P72基因的TaqMan探针qPCR方法,并与OIE的特异性引物和TaqMan探针进行灵敏度、稳定性和特异性比较.结果显示:本研究建立的qPCR检测方法,标准曲线线性关系良好,R2值可达到0.9932,灵敏性最低能检测到10 copies/μL,与OIE引物扩增灵敏度相当,比普通PCR方法高100倍.该方法重复性良好,批内和批间变异系数均小于1％.这一方法为我国非洲猪瘟疫情的快速确诊提供了必要的分子诊断工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬静	湖南农业大学动物医学院	58	150	7.0	10.0
2	陈鸿军	中国农业科学院上海兽医研究所	57	114	6.0	8.0
3	任名	中国农业科学院上海兽医研究所	2	4	1.0	2.0
7	孙海伟	中国农业科学院上海兽医研究所	7	1	1.0	1.0
8	于婉琪	中国农业科学院上海兽医研究所	3	15	1.0	3.0
9	牛婷婷	中国农业科学院上海兽医研究所	1	0	0.0	0.0