猪瘟病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR鉴别方法的建立与应用

• 作者: 刘俊 周远成 徐璐 汤波 沙莎 王琴 范学政 赵启祖 邹兴启 陈蕾 黄伟
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟 荧光定量PCR TaqMan-MGB 兔化弱毒疫苗
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 4366-4371
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.12.031

摘要

[目的]建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和BCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具.[方法]在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探针,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件,进行特异性、灵敏度和临床样本符合检验.[结果]该方法在10~0～10~(-7)范围内线性相关系数为0.998,检测极限达5.3×10~(-2)pg病毒核酸;对24个质控样本检测结果显示,该方法能检测除猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)以外的猪瘟流野毒株,其它猪相关致病病原检测阴性;对122份疑似猪瘟样本检测的结果与本实验室建立的RT-nPCR方法的符合率为94.3%(115/122),阳性和阴性符合率分别为86.4%(38/44)和98.7%(77/78),Kappa值为0.87＞0.75.[结论]建立的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法能鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒,且特异性好、灵敏度高、与笔者先前建立的RT-nPCR方法对临床样本的检测结果具有高度的一致性.