黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 尹彦文 屈素洁 施开创 温丽霞 王海清 胡杰
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 黏菌素 mcr-1基因 TaqMan-MGB探针 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1447-1452
• 页数: 6页
• 分类号: S854.44
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.07.28

摘要

[目的]建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持.[方法]针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性.[结果]TaqMan-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:Premix Ex TaqTM 10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL.扩增程序:95℃预变性20 s;95℃10 s,60℃20 s,进行40个循环.该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37％～1.18％,均小于1.20％.采用建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株.[结论]针对mcr-1基因建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施开创		46	217	7.0	12.0
2	温丽霞		11	57	3.0	7.0
3	胡杰		34	90	5.0	7.0
4	尹彦文		14	36	4.0	5.0
5	屈素洁		28	57	4.0	5.0
6	王海清		4	43	3.0	4.0