鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 冯金牛 况少祥 刘平 唐秀英 李庆阳 王林川 谢永福 陈瑞爱 陈芳艳
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸭坦布苏病毒 TaqMan探针 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 18-22
• 分类号: QS852.659.6
• 字数: 3472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.07.004

摘要

根据鸭坦布苏病毒(DTMUV) BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法.特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性.其表达式为C1＝-3.32×1g Copy number +41.151,R2＝0.998,R循环效率Eff％＝100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5％.利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100％,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85％(17/20)和75％(15/20).建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查.