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摘要:
[目的]利用SYBR Green Ⅰ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法.[方法]针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin引物,将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验.[结果]结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上,检测极限约为1.0E+01拷贝数质粒DNA;特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线;批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%;用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%.[结论]本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR的方法,为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法.
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内容分析
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文献信息
篇名 坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立
来源期刊 中国农业科学 学科 农学
关键词 坦布苏病毒 NS5基因 E基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR 相对定量
年,卷(期) 2012,(21) 所属期刊栏目 兽医
研究方向 页码范围 4492-4500
页数 分类号 S1
字数 语种 中文
DOI 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.21.018
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 刁有祥 山东农业大学动物科技学院 182 1328 18.0 28.0
2 张颖 山东农业大学动物科技学院 11 118 5.0 10.0
3 鞠小军 山东农业大学动物科技学院 13 118 6.0 10.0
4 唐熠 山东农业大学动物科技学院 12 191 7.0 12.0
5 武利利 山东农业大学动物科技学院 3 58 2.0 3.0
6 崔京腾 山东农业大学动物科技学院 8 84 4.0 8.0
7 于春梅 山东农业大学动物科技学院 8 183 6.0 8.0
8 高绪慧 山东农业大学动物科技学院 7 171 5.0 7.0
传播情况
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引文网络
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共引文献  (236)
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研究主题发展历程
节点文献
坦布苏病毒
NS5基因
E基因
SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR
相对定量
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国农业科学
半月刊
0578-1752
11-1328/S
大16开
北京中关村南大街12号
2-138
1960
chi
出版文献量(篇)
9193
总下载数(次)
12
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254208
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