坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立

• 作者: 于春梅 刁有祥 唐熠 崔京腾 张颖 武利利 鞠小军 高绪慧
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 坦布苏病毒 NS5基因 E基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR 相对定量
• 年，卷（期）: 2012,（21）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 4492-4500
• 分类号: S1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.21.018

摘要

[目的]利用SYBR Green Ⅰ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法.[方法]针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin引物,将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验.[结果]结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上,检测极限约为1.0E+01拷贝数质粒DNA;特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线；批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5％；用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100％.[结论]本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR的方法,为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刁有祥	山东农业大学动物科技学院	182	1328	18.0	28.0
2	张颖	山东农业大学动物科技学院	11	118	5.0	10.0
3	鞠小军	山东农业大学动物科技学院	13	118	6.0	10.0
4	唐熠	山东农业大学动物科技学院	12	191	7.0	12.0
5	武利利	山东农业大学动物科技学院	3	58	2.0	3.0
6	崔京腾	山东农业大学动物科技学院	8	84	4.0	8.0
7	于春梅	山东农业大学动物科技学院	8	183	6.0	8.0
8	高绪慧	山东农业大学动物科技学院	7	171	5.0	7.0