表达EGFR与HER2双抗体融合蛋白腺病毒载体研究

• 作者: 侯兵 范丽 金华君 钱其军
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 医学
• 关键词: cetuximab Herstatin 融合蛋白 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 2171-2176
• 分类号: R730.54
• 字数: 4568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-1815.2011.10.005

摘要

构建携带Cetuximab全长抗体与Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)融合蛋白的腺病毒,探讨其在体外表达情况,及其与EGFR和HER2的结合能力.通过PCR,将抗体cetuximab基因与编码Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)的序列融合,构建携带西妥昔单抗全长基因与Herin融合基因的腺病毒穿梭载体pDC339-AT2一Herin,并在293细胞内包装成重组病毒Ad5-AT2-Herin.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Ad5-AT2-Herin表达全长抗体融合蛋白的体外表达量;应用Western印迹法检测所表达全长抗体轻重链的完整性及均衡性;应用间接免疫荧光法(IFA)检测所表达的融合蛋白与EGFR(+)Her2(-)的A431细胞,以及EGFR(-)Her2(+)的SK-OV-3细胞膜结合的特异性.ELISA检测分析表明,AdS-AT2-Herin在293细胞中的表达量为209.3 ng/mL-317.3 ng/mL;Western blot显示轻重链表达平衡,大小符合预期;间接免疫荧光(IFA)显示腺病毒表达的融合蛋白与A431细胞表面受体EGFR及SK-OV-3细胞表面受体Her2均能特异性结合.成功构建携带EGFR和HER2双特异性抗体基因的腺病毒载体Ad5-AT2-Herin,该载体在体外能高效表达双特异性抗体蛋白AT2-Herin,而且AT2-Herin蛋白能在体外与EGFR和HER2特异结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱其军	第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室	106	367	10.0	15.0
2	范丽	第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室	90	882	16.0	25.0
3	侯兵	第二军医大学长海医院门诊部体检中心	7	12	2.0	3.0
4	金华君	第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室	7	27	2.0	5.0