甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测法的建立及其在南京地区甲流防控早期的应用

• 作者: 丁洁 史小超 叶艳华 张洪英 杜雪飞 石利民 祈贤 谢国祥 邓菲
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光定量RT-PCR 甲型H1N1流感病毒 检测
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 131-134
• 分类号: R511.7
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立并应用Taqman探针实时荧光RT-PCR法10 μl检测体系对91例输入性甲型H1N1流感疑似病例及密切接触者进行病毒核酸特异、灵敏、快速的检测和感染排除.[方法]采用美国CDC公布的探针和引物序列,比较了两种反应条件(无预扩增、有预扩增)和10 μl、12.5 μl及25 μl3种反应体系的扩增效率;用预扩增10 μl体系对季节性流感病毒核酸进行扩增;用预扩增程序及10 μl体系对南京市91例输入性疑似病例及密切接触者的样本进行扩增,同时设置阳性对照和阴性对照.[结果]应用美国CDC公布的探针和四对引物序列,3种反应体系对甲型H1N1流感病毒都可以获得有效扩增,而且应用3种反应体积的扩增CT值没有统计学差异(P＞0.05).增加预扩增的反应条件下敏感度有显著提高(P＜0.05).用10 μl反应体系及增加预扩增程序对季节性流感病毒核酸进行扩增,第2对引物(猪流感通用引物)与第3对引物(甲型H1N1流感引物)未获得阳性扩增曲线,甲1、甲3亚型病毒核酸的扩增只有第一对引物(甲型通用引物)与第四对引物(阳性内参)获得阳性扩增曲线,对乙型流感病毒核酸的扩增只获得阳性内参的扩增曲线.对南京市91例输入性甲流疑似病例及密切接触者进行了有效捡测和感染排除,并检测到第一例输入性甲型H1N1流感病毒感染病例,其四对引物扩增结果均为阳性.[结论]该检测方法对甲型H1N1流感病毒有高度的特异性,对甲型流感病毒有通用性,10 μl反应体系及增加预扩增程序可从疑似甲型H1N1流感患者鼻咽拭子中直接检测甲型H1N1流感病毒核酸,该方法可用于甲型H1N1流感病毒的日常检测并大大降低检测成本.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜雪飞		17	75	5.0	8.0
2	谢国祥		23	171	7.0	12.0
3	丁洁		37	169	8.0	10.0
4	张洪英		31	117	5.0	9.0
5	石利民		16	86	4.0	8.0
6	叶艳华		23	103	6.0	9.0
7	史小超		8	21	3.0	4.0
8	祈贤		1	1	1.0	1.0
9	邓菲		1	1	1.0	1.0