人外周血树突状细胞的诱导、鉴定及活性测定

• 作者: 何洁 佟晓娜 刘凌 朱向情 潘兴华 蔡学敏 马丽花
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 树突细胞 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素4
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 231-236
• 页数: 6页
• 字数: 4014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2012.04.001

摘要

目的 探讨人外周血来源单个核细胞诱导为树突状细胞(DC)的方法,并对诱导细胞进行活性测定.方法 采用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,然后加入100 ng/ml 人粒- 巨噬细胞集落刺激因子和30 ng/ml 人白细胞介素4 培养5 d,隔天半量换液,补充半量的细胞因子,于第5、6 天,每孔加入1000 U/ml 肿瘤坏死因子,于培养第7 天收集悬浮细胞.倒置显微镜每天观察细胞生长情况,用CD1a 和CD83 通过流式细胞仪和免疫荧光染色检测细胞表面表型,把DC 与T 细胞混合培养,按1:1、1:2、1:5 的比例加入T 淋巴细胞,MTT 法检测T 细胞的增殖活性.采用单因素方差分析,分析各实验组与对照组的细胞表型差异和刺激T 淋巴细胞增殖活性能力比较.结果 培养7 d 即可得到大量DC,显微镜下可见细胞体积增大、数量增多、形态不规则、表面大量突起,为典型的DC 特征,免疫荧光染色可以看到CD1a 和CD83 高表达,培养4 d,流式细胞检测显示CD1a 阳性表达率达80.80 ﹪,CD83 阳性表达率达19.5 ﹪,CD1a 和CD83 双阳性细胞达16.9 ﹪,3 组表达阳性率间比较,差异均有统计学意义(F = 695.293,P < 0.01).同时能刺激T 细胞的增殖反应,其中DC 数与T 细胞数比为1:1 时的刺激增强作用最强,吸光度值为0.74,活性比对照组增加3 倍,差异有统计学意义(P 值均< 0.05).结论 通过体外添加细胞因子,成功诱导外周血单个核细胞为DC.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡学敏	昆明总医院临床实验科	1	5	1.0	1.0
2	朱向情	昆明总医院临床实验科	1	5	1.0	1.0
3	刘凌	昆明总医院检验科	1	5	1.0	1.0
4	佟晓娜	昆明总医院临床实验科	1	5	1.0	1.0
5	何洁	昆明总医院临床实验科	2	5	1.0	2.0
6	马丽花	昆明总医院临床实验科	1	5	1.0	1.0
7	潘兴华	昆明总医院临床实验科	3	5	1.0	2.0