基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的棉花EcoTILLING技术体系创建

• 作者: 吕远大 周宝良 张天真 田亮亮 邓康胜 郭旺珍 陶涛
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 棉花 EcoTILLING 单核苷酸多态性 CEL Ⅰ酶
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-7
• 分类号: Q943
• 字数: 6037字
• 语种: 中文

摘要

以棉花纤维发育相关基因GhSUS1为目标基因,从EcoTILLING技术中常用的关键酶CEL Ⅰ的提取、活性检测、目标基因引物设计及酶切等方面入手,开展了棉花EcoTILLING技术体系的创建研究.结果表明:所提取的CEL Ⅰ活性高,稳定性好.在42℃、酶切体系为8μLPCR扩增产物中加入2μL粗酶液,与缓冲液等量混合,酶切45min,能有效地对单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)所在的异源双链错配位点进行酶切.对棉花GhSUS1基因设计A和D染色体亚组特异性引物进行等位基因的多态性分析,结果表明:EcoTILLING结果与测序结果一致,说明建立的基于PAGE的EcoTILLING技术体系稳定可靠,可用于棉花复等位基因发掘研究.