自然杀伤细胞分离、培养方法的建立

• 作者: 何洁 刘凌 吴琼 庞荣清 张晓晓 朱向情 潘兴华 王强 赵晶 阮光萍 陈翠竹 雷力 马丽华
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 外周血 自然杀伤细胞 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 269-273
• 页数: 5页
• 字数: 2901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2012.04.007

摘要

目的 建立自然杀伤细胞(NK)的分离、培养方法,并检测其杀伤活性.方法 抽取健康人外周血20 ml,采用淋巴分离液分离单个核细胞,再用苯丙氨酸甲酯(PME)去除单核巨噬细胞、B 细胞,从而纯化单个核细胞.培养3 ~ 5 h,收集黏附于培养板底部表面的细胞(即A-NK 细胞),重新培养2 周.实验过程中用显微镜观察细胞形态,用流式细胞术检测标志性抗原,用MTT 法检测杀伤率.结果 单个核细胞在诱导的第3 天开始出现集落,第7 天时集落达到高峰.流式细胞术检测第7 天的表面抗原,CD3- 为96.5 ﹪,CD3- 中CD16+ 和CD56+ 双阳性的占31 ﹪.MTT 法检测诱导培养的第1 天和第4 天的杀伤率,效靶比在20:1 时杀伤率最高分别是(58.86 ± 4.12) ﹪和(54.42 ± 3.02) ﹪ ;当检测第7 天,效靶比在5:1 时杀伤率最高(46.71 ± 3.41) ﹪ ;第10 天,效靶比在10:1 时杀伤率最高(63.27 ± 3.18) ﹪;检测第14 天,效靶比在5:1 的情况下,杀伤率是最高(72.63 ± 2.65) ﹪.结论 本实验室通过贴壁和诱导的方法可以快速获得纯度高、杀伤活性强的NK 细胞.