人羊水来源间充质干细胞冻存后生物学特征研究

• 作者: 刘丽凤 王一茹 王禹 白静 陈杰
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 人羊水间充质干细胞 冻存复苏 生物学特征
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 141-145
• 页数: 5页
• 语种: 中文

摘要

目的 体外分离培养人羊水间充质干细胞(human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells,HAFMSCs),观察低温冻存复苏后HAFMSCs生物学特征,为进一步研究奠定理论基础. 方法 取12份自愿捐赠的孕16～20周羊水标本,采用改良两步法分离培养HAFMSCs,用含量不同的FBS、DMSO冻存液冻存细胞,液氮冻存12周后42℃水浴复苏,锥虫蓝染色检测细胞存活率,MTT法检测细胞增殖速度并绘制生长曲线,流式细胞仪检测冻存复苏后HAFMSCs表型.对冻存复苏后的HAFMSCs进行成脂、成骨诱导分化培养,并分别采用油红O、von Kossa染色进行鉴定；实时荧光定量PCR分析细胞冻存前后Oct-4、Nanog mRNA表达差异. 结果 细胞冻存12周后,不同的冻存方案对细胞存活率影响有差异,优化的冻存方案为DMEM/FBS/DMSO=50％/40％/10％.冻存复苏后的HAFMSCs呈漩涡状排列,生长曲线呈S形,与冻存前细胞生长曲线相似.流式细胞仪检测示冻存复苏后细胞的MSCs表型CD29、CD44、CD73、CD90为阳性,造血干细胞表型CD34、CD45为阴性.成脂、成骨诱导21d,油红O、yon Kossa染色均呈阳性.实时荧光定量PCR检测示冻存前后Oct-4、Nanog mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 HAFMSCs具有体外增殖快、分化能力强的优势；并可耐受短期冻存,复苏后细胞存活率高,生物学特征及分化潜能未发生明显变化,冻存液DMEM/FBS/DMSO=50％/40％/10％是较好冻存方案.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王禹		131	610	14.0	19.0
2	王一茹		20	30	4.0	5.0
3	白静		46	162	8.0	10.0
4	陈杰		14	23	3.0	4.0
5	刘丽凤		15	66	5.0	8.0