营养剥夺诱导髓核细胞Bcl-2/腺病毒干扰蛋白3表达及线粒体转位的实验研究

• 作者: 刘杰 周跃 彭娜 曾顺福 王建 陆焱
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 髓核细胞 Bcl-2/腺病毒干扰蛋白3 线粒体 营养剥夺 大鼠
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 166-171
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测Bcl-2/腺病毒干扰蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa-interacting protein 3,BNIP3)表达及线粒体转位情况,为进一步探索髓核细胞退变死亡机制提供实验依据. 方法 成年清洁级SD大鼠2只,雌雄不限,体重150～200 g.体外分离获取鼠尾椎间盘髓核细胞,将传代后细胞分别置入正常环境(对照组:L-DMEM培养基、10％FBS、21％O2)和营养剥夺环境(实验组:DMEM无糖无血清培养基、1％ O2)培养24、48、72 h后,实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot检测BNIP3基因及蛋白表达,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位. 结果 实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot检测显示对照组细胞低表达BNIP3；实验组随培养时间延长,BNIP3表达呈上升趋势,且BNIP3与线粒体相结合；除培养后24 h实验组BNIP3基因表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各时间点实验组BNIP3基因及蛋白表达与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测显示,对照组细胞凋亡率较低,且细胞保持较高的线粒体膜电位；而实验组随培养时间延长细胞凋亡率增加、线粒体膜电位降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 营养剥夺可能通过诱导BNIP3表达增加并结合线粒体导致线粒体功能障碍,最终导致髓核细胞死亡.