HMME介导的光动力疗法对骨肉瘤细胞的杀伤效应及机制研究

• 作者: 付东 华莹奇 吴非 孙梦熊 廖宇昕 曾辉 王卓莹 蔡郑东
• 来源期刊: 中国骨与关节杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 光动力疗法 骨肉瘤 HMME 凋亡 基因
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 494-500
• 分类号: R738.1|R730.57
• 字数: 5054字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-252X.2012.05.012

摘要

目的探讨血卟啉单甲醚介导的光动力疗法(HMME-PDT)对骨肉瘤LM-8细胞增殖与凋亡的影响及其机制.方法将LM-8细胞与不同浓度的HMME (10、20、30μg/ml)共同孵育,4h后,给予不同能量密度的激光(3、6、9J/cm2)照射,同时设空白组(无光敏剂也无光照)、暗毒组(无光照但加入光敏剂)、激光组(不加光敏剂但给予光照).MTT法检测细胞存活率,采用AnnexinV-FITC/PI染色的流式细胞分析法检测LM-8细胞凋亡和周期情况,Hoechst33342染色法观察细胞凋亡,实时定量PCR (QRT-PCR)分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelA mRNA表达水平,免疫印迹(Western blotting)分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelA蛋白的相对表达量.结果 HMME-PDT能显著抑制骨肉瘤LM-8细胞增殖,且杀伤效应随着HMME浓度及能量密度的增高而增强.然而单独光照或单独给予光敏剂孵育,对骨肉瘤LM-8细胞均无杀伤作用.流式细胞术检测发现凋亡率显著增高,10μg/ml HMME组为(12.3±2.82)%,20μg/ml HMME组为(20.67±5.58)%,30μg/ml HMME组为(42.53±4.64)%,凋亡率与空白组比较,结果分别为(t=-2.889,P=0.045)、(t=-4.418,P=0.014)、(t=-5.780,P=0.04).周期结果显示:G0/G1期细胞明显增高、S期细胞明显降低,30μg/ml组G0/G1期为(50.09±3.15)%、S期为(28.17±1.10)%,与空白对照组比较,结果分别为(t=-6.081,P=0.004)、(t=5.852, P=0.004).HMME-PDT处理LM-8细胞后经Hoechst33342染色后呈现出典型的凋亡改变(如:核固缩、细胞变圆等).QRT-PCR和Western bloting结果显示:HMME-PDT可显著上调Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而增高.而HMME-PDT可明显下调Bcl-x、p53、RelA mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而降低.结论在体外HMME-PDT对骨肉瘤LM-8细胞有显著的杀伤效应,其杀伤效应与Caspase-3、Bcl-x、p53和RelA密切相关.