神经营养素4前导序列介导Exendin-4表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 张静 徐静 杨广笑 焦杨 王俊红 王全颖 王枫 谢璇 郭永红
• 来源期刊: 神经药理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒构建 Exendin-4 NT4 腺伴病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 实验方法学
• 页码范围: 22-28
• 页数: 7页
• 分类号: R587.1
• 字数: 3093字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建神经营养素4前导序列介导的可分泌表达Exendin-4的重组腺伴病毒载体，为探究Exendin-4用于2型糖尿病临床治疗提供实验基础。方法：使用互补引物/模板法及T载体克隆法扩增Exendin-4的cDNA克隆，连接于NT4前导肽序列的3′端，融合基因NT4- Exendin-4亚克隆于穿梭质粒pSSHG，转染HEK-293细胞，包装病毒，斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果：经酶切、测序证实克隆出Exendin-4 cDNA，成功构建同一开放读码框ORF的NT4前导肽Exendin-4 cDNA克隆，得到高滴度（2.5×109 pfu·L-1）的重组腺相关病毒。结论：通过分子克隆技术成功制备了Exendin-4的重组腺伴病毒载体pSSHG /NT4-Exendin-4并成功包装了较高浓度的重组病毒，为进一步研究Exendin-4功能及应用于临床打下基础。