纤维素酶高产菌的筛选鉴定及纤维素酶基因的克隆与表达

• 作者: 刘海艳 曹斌云 杨明明 白龙 赵海波
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 纤维分解菌 筛选 纤维素酶基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 92-98
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文

摘要

为寻找新纤维素酶和纤维素酶基因资源,以羧甲基纤维素钠（CMC）改良的BHM培养基筛选菌株,经初筛和复筛筛选出目的菌株后,采用革兰氏染色法和16SrDNA基因片段比对法对筛选出的菌株进行鉴定;设计引物对P扩增其纤维素酶基因,连于pET-28a（＋）载体构建原核表达载体并转入大肠杆菌BL21（DE3）进行表达,表达结果采用SDS-PAGE和测定表达产物活性的方法来检验。结果显示,本研究成功筛选出一株新的具有较高纤维素酶活的短小芽孢杆菌BY-1,该菌所产纤维素酶具有较好的热稳定性和酸碱稳定性,最适宜温度和pH分别为55℃和7.45,在此条件下最高酶活性为0.921 6μmol/（mL.min）;此外,还成功克隆出1个1 851bp的纤维素酶新基因bglC-BY,具有GH9/CBM3纤维素酶结构,经IPTG诱导,SDS-PAGE图谱上于70ku有1个明显的蛋白条带,表达产物酶活性为0.541 3μmol/（mL.min）。本研究筛选出的短小芽孢杆菌内切纤维素酶活较高,具有一定的应用前景。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹斌云	西北农林科技大学动物科技学院	111	665	14.0	19.0
2	杨明明	西北农林科技大学动物科技学院	47	174	8.0	10.0
3	白龙	西北农林科技大学动物科技学院	5	43	4.0	5.0
4	刘海艳	西北农林科技大学动物科技学院	3	39	2.0	3.0
5	赵海波	西北农林科技大学动物科技学院	4	39	2.0	4.0