靶向敲减Ras癌蛋白融合型泛素连接酶E3的构建

• 作者: 卢朝辉 张强 谷雨妹 陈杰 马怡晖
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 泛素 蛋白酶体 泛素连接酶 Ras癌蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 313-318
• 分类号: R446.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2012.04.001

摘要

目的 应用蛋白质敲减技术原理,构建理论上能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合型泛素连接酶E3的真核表达载体.方法 选取Raf-1、PI3K、RalGDS中能够与Ras蛋白相互作用的结合结构域和具有泛素连接酶活性的F-Box及U-Box作为功能结构域,采用分子克隆技术依次将其连入pcDNA3.1中构建融合蛋白表达载体,双酶切、PCR和测序技术检测连入核苷酸片段的正确性,Western blot检测融合蛋白表达载体在真核细胞内表达的正确性和作用有效性.结果 成功获得6个融合蛋白E3表达载体,5个能够在真核细胞内有效表达,其中(RBD+ CRD) Raf-1 -U-Box-pcDNA3.1能够敲减人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中Ras蛋白.结论 成功构建能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合蛋白表达载体,为下一步应用蛋白质敲减技术奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢朝辉	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科	29	101	6.0	8.0
2	陈杰	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科	77	516	10.0	19.0
3	张强	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科	4	83	3.0	4.0
4	马怡晖	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科	26	62	5.0	6.0
8	谷雨妹	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科	1	0	0.0	0.0