基于毛细管电泳技术的牡丹SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

• 作者: 史倩倩 周琳 王雁 黄国伟
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牡丹 SRAP 毛细管电泳 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与工程
• 页码范围: 158-164
• 分类号: S685.11
• 字数: 3715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2286.2012.01.028

摘要

以牡丹叶片DNA为模板,对SRAP -PCR反应程序进行研究,确定适合的反应程序,即94℃预变性5 min; 94℃变性1 min,33℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环；随后94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环；最后72℃延伸10 min.基于毛细管电泳技术,采用正交设计L18( 37)对牡丹SRAP - PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)3个水平进行了优化,构建了牡丹SRAP最佳反应体系:模板DNA 50 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Mg2浓度2.5 mmol/L,引物浓度0.4 μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,总体积为25 μL.各因素对扩增结果影响程度均不同:dNTPs＞引物＞DNA模板＞Mg2+＞Taq酶.运用该体系从756个SRAP引物组合中筛选出多态性好、条带清晰的26个引物组合,并证明了该体系稳定可靠.该体系的建立以及引物组合的确定为今后利用SRAP分子技术进行牡丹的相关研究奠定了科学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王雁	中国林科院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	8	75	5.0	8.0
2	史倩倩	中国林科院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	2	5	2.0	2.0
3	周琳	中国林科院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	2	5	2.0	2.0
4	黄国伟	中国林科院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	1	3	1.0	1.0