小麦赤霉病菌α-微管蛋白原核表达及纯化研究

• 作者: 于金凤 周明国 张聪 彭迪 徐建强
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦赤霉病菌 α-微管蛋白 包涵体 融合蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 252-259
• 分类号: S435.121
• 字数: 5653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0412-0914.2012.03.004

摘要

为了制备小麦赤霉病菌的α-微管蛋白,以小麦赤霉病菌cDNA为模板,PCR扩增出α1-、α2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,转化到表达宿主菌Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达.SDS-PAGE及Western-blot结果表明:融合蛋白主要以包涵体形式存在；融合蛋白分子量约为52.1和55.9 kD；融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应.通过对包涵体洗涤及透析复性后采用HisTrapTM HP Columns对融合蛋白进行纯化,可以得到纯度较高的融合蛋白.该研究为体外筛选以微管蛋白为靶标的杀菌剂提供了物质基础.