E.coli M15碱性磷酸酶的表达、纯化及活性分析

• 作者: 冒艳丽 刘双喜 张莉君 朱小平 李国才 杜庆辉 焦红梅 贺丽
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 M15 碱性磷酸酶 表达与纯化 对硝基苯磷酸二钠 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 35-38
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2909字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2012.06.137

摘要

目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性.方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因；构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.coli BL21(DE3)进行表达；IMAC Ni-NTA柱层析法纯化重组蛋白；重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性.结果:克隆得到了序列约1 400bp phoA编码基因,原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP),纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性,有效反应温度范围大,在27℃～67℃都具有较高的催化活性,在pH7.5 ～8.0间催化活性最高.结论:克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因,为EAP的工业化生产及应用提供了生物材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦红梅	扬州大学医学院	28	87	5.0	8.0
2	李国才	扬州大学医学院	48	308	7.0	16.0
3	朱小平	扬州大学临床医学院检测中心	12	60	6.0	6.0
4	杜庆辉	扬州大学医学院	5	19	2.0	4.0
5	贺丽	扬州大学医学院	2	2	1.0	1.0
6	刘双喜	扬州大学医学院	3	6	2.0	2.0
7	张莉君	扬州大学医学院	1	2	1.0	1.0
8	冒艳丽	扬州大学医学院	1	2	1.0	1.0