水稻T-DNA插入雄配子不育突变体的创建

• 作者: 于法科 刘华清 杨绍华 王锋 陈睿
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 异常分离 雄配子不育 T-DNA插入 突变体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 173-181
• 分类号: Q754|S511.0352
• 字数: 7599字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7216.2012.02.006

摘要

对6000多个转基因T-DNA插入水稻株系进行异常遗传分离分析(选择标记基因为潮霉素磷酸转移酶基因hpt),发现216个转基因株系的T-DNA呈现1∶1分离.接着利用测交方法检测T-DNA的遗传规律,初步确定其中57个候选株系为雄配子不育候选突变体.随后对候选突变株进行多代遗传分析及花粉细胞学观察,结果表明其中的38个突变体花粉黑染率约为50％,自交后代T-DNA的异常分离是由于转基因植株的花粉半不育所致,T-DNA的传递只能通过雌配子体.另外,利用ELISA定量测定突变体中crylAc(Bt)基因编码蛋白的表达量,发现花粉的这种不育性与外源基因的表达量之间没有直接关系,推测这38个雄配子突变体败育的原因主要是T-DNA插入引起内源基因变异.TAIL-PCR获得了22个水稻雄配子不育T-DNA插入突变体的侧翼序列,通过BLAST检索,定位了15个不同的插入位点,其中12个插入位点位于基因区或基因调控区.