针对 MAG,OMgp,NogoA 基因的 scFv (OMgp)-9R-siRNA 复合物的制备和鉴定

• 作者: 严望军 刘铁龙 周许辉 肖建如 贾连顺 马建国
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 单克隆抗体 单链抗体 RNA干扰技术
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 311-317
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4747字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2012.04.012

摘要

目的 运用抗体靶向技术联合siRNA形成双特异性复合物scFv-9R-siRNA的高效递送系统,该系统通过抗OMgp的scFv把MAG,OMgp和Nogo A的特异性siRNA特异性运输至受损神经细胞,从而抑制这三种轴突抑制物的表达,改善脊髓损伤后的局部微环境,阻断这些髓磷脂相关抑制物对轴突再生的抑制作用,为后续的大鼠模型试验奠定基础.方法 (1)根据基因重组技术,利用制备好的高效抗OMgp单克隆抗体构建单链抗体scFv(OMgp),并在此基础上非共价合成针对MAG,OMgp,NogoA基因的scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物;(2)体外鉴定scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物效果:鉴定MAG,OMgp,NogoA三种抑制物的mRNA和蛋白表达水平,同时与非神经细胞对比,研究引入scFv后所产生的靶细胞特异性.结果 (1)成功制备抗大鼠OMgp单克隆抗体E811,并通过ELISA和Western blot对已制备的抗大鼠OMgp单克隆抗体E811进行了特异性和敏感性鉴定,在此基础上成功获得scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物;(2)体外实验证实:scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物同时特异性下调MAG,OMgp和Nogo A基因表达.结论 单链抗体技术(scFv)解决了siRNA的特异性导入受损神经元问题,为体内应用siRNA技术治疗脊髓损伤奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾连顺	第二军医大学附属长征医院骨科	612	7026	39.0	55.0
2	肖建如	第二军医大学附属长征医院骨科	105	936	16.0	25.0
3	严望军	第二军医大学附属长征医院骨科	59	446	12.0	16.0
4	刘铁龙	第二军医大学附属长征医院骨科	21	142	7.0	11.0
5	周许辉	第二军医大学附属长征医院骨科	88	624	12.0	19.0
6	马建国	中国人民解放军第425医院脊柱外科	8	26	3.0	4.0