利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白

• 作者: 何乐亚 傅寅佳 刘鹭 徐丰 李国东 胡俊波 闵江 陶德定 魏欣 龚建平
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞周期素B1 四环素 免疫沉淀 质谱
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 534-536,540
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 字数: 2545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2012.05.006

摘要

目的 利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1 (Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白.方法 加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1.将未诱导和用四环素诱导48 h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(mass spectrometry,MASS)行蛋白鉴定.结果 用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8 isoform 1).结论 除Cyclin B1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用.