EZH2对鼻咽癌细胞增殖和侵袭影响的研究

• 作者: 万仁强 刘雄 张宝 李刚 李湘平 林少雄 梁碧君 王路 田文栋 罗花南 鲁娟
• 来源期刊: 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 DNA结合蛋白质类 转录因子 基因沉默 细胞增殖 肿瘤浸润 上皮间质转化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 298-304
• 分类号: R246.81
• 字数: 5536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-0860.2012.04.008

摘要

目的 探讨果蝇zeste基因增强子人类同源物(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)对鼻咽癌细胞增殖及侵袭能力的影响及其分子机制.方法 构建特异性的短发夹状(short hairpin RNA,shRNA)EZH2慢病毒干扰载体,转染293FT细胞包装成慢病毒后,感染鼻咽癌细胞株5-8F.采用四甲基偶氮唑蓝法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖状态及细胞周期的改变,利用细胞划痕实验及Invasion Chamber侵袭小室测定法检测迁移和侵袭能力变化,荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测转染EZH2基因后的mRNA和蛋白表达水平改变及上皮间质转化相关标志物的变化.结果 成功构建EZH2 shRNA慢病毒干扰载体,包装的慢病毒感染鼻咽癌细胞株5-8F后,EZH2的mRNA和蛋白表达水平显著下调.四甲基偶氮唑蓝法显示,细胞接种96 h后,5-8F/shEZH2组的生长速度较空载组显著下降(P＜0.001),平均(x±s,下同)细胞克隆形成率为(31.56±7.49)％明显小于空载组的(84.44±7.12)％,差异有统计学意义(P=0.001)；细胞周期结果表明,沉默EZH2表达的细胞增殖受抑,主要通过诱导G0/G1期阻滞,减少S期细胞的比例；基因转染沉默EZH2后,鼻咽癌细胞的运动迁移能力显著下降,5-8 F/shEZH2组细胞划痕48 h的相对迁移率为(0.58±0.05)明显低于空载组的(0.81±0.02),差异有统计学意义(P ＜0.000)；体外侵袭能力明显降低,5-8F/shEZH2组穿膜细胞数(72.23 ±4.08)个,与其相对应空载组(150.95 ±16.27)个比较,明显减少(P＜0.000)；5-8F/shEZH2细胞的上皮标志物上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白18( Keratin 18)的mRNA水平分别上调1.77倍、1.58倍,间质标志物p-连环蛋白(β-catenin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)分别下调18.04％、41.18％；蛋白免疫印迹证实此四者的蛋白水平表达亦出现相同趋势.结论 EZH2可显著促进鼻咽癌细胞的体外增殖和侵袭能力,其机制可能是通过诱导上皮间质转化促进鼻咽癌转移.