Ras蛋白适配子体外电转染人大隐静脉平滑肌细胞的初步研究

• 作者: 吴红兵 张昊 王志维 胡小平
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 电穿孔 细胞转染 适配子 血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法研究
• 页码范围: 191-194
• 分类号: R654.3
• 语种: 中文

摘要

目的:采用电穿孔方法,介导Ras蛋白ssDNA适配子体外转染人大隐静脉平滑肌细胞,探讨外源性DNA转染血管平滑肌细胞的最适电转条件.方法:体外培养3-8代人大隐静脉平滑肌细胞,选择方波、1个脉冲、不同的电压及脉冲时间,应用电穿孔仪将Cy3标记的Ras蛋白ssDNA适配子转染至平滑肌细胞.采用CCK-8法观察细胞存活率,以及倒置荧光显微镜观察适配子转染效率.结果:细胞在电压160 V、脉冲时间15 ms时,细胞存活率最高,为(96.17±2.60)％；电压280 V、脉冲时间 25 ms时,细胞存活率最低,为(30.04±2.58)％.细胞存活率随着电压的增大、脉冲时间的延长而降低.电压200 V以下,转染率随电压增大、脉冲时间延长而升高,并于电压为200 V、脉冲时间为25 ms时,转染率到达峰值,为(84.41±5.16)％.但是,电压大于200 V时,转染率却随电压增大、脉冲时间延长而降低,电压为280 V、脉冲时间为25 ms时,转染率降至最低,为(24.54±7.07)％.电压200V、脉冲时间20 ms时,可获得最适转染效率及细胞存活率.结论:在方波,1个脉冲,适当的电压、脉冲时间下,电穿孔法转染血管平滑肌细胞可快速、简便地获得较高的转染效率及细胞存活率.电穿孔法是研究原代、化学法难转染平滑肌细胞生物学行为较为理想的转染方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志维	武汉大学人民医院心血管外科	199	582	10.0	13.0
2	胡小平	武汉大学人民医院心血管外科	56	147	6.0	8.0
3	吴红兵	武汉大学人民医院心血管外科	58	176	8.0	9.0
4	张昊	武汉大学人民医院心血管外科	16	13	2.0	3.0