共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

• 作者: 丁勇 戴应 招志毅 李善义 杨皓庄 谭美华 钟敬祥 陈建苏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 诱导多能干细胞 角膜内皮细胞 混合培养 显微镜检查,原子力 水通道蛋白1
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1488-1493
• 分类号: R772.2
• 字数: 4298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.08.027

摘要

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据.方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化.结果:培养扩增的兔CECs 形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的 CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性.结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈建苏	暨南大学医学院眼科研究所	62	385	12.0	16.0
2	钟敬祥	暨南大学第一临床医学院眼科	49	150	6.0	8.0
3	丁勇	暨南大学第一临床医学院眼科	30	217	9.0	13.0
4	李善义	暨南大学再生医学教育部重点实验室	4	12	3.0	3.0
5	戴应	暨南大学再生医学教育部重点实验室	4	10	3.0	3.0
6	谭美华	暨南大学第一临床医学院眼科	6	16	3.0	3.0
7	招志毅	暨南大学第一临床医学院眼科	6	7	2.0	2.0