不同冻存保护剂对绵羊前体脂肪细胞冻存效果的影响

• 作者: 乔自林 刘翊中 吴建平 徐红伟 曹忻 杨具田 臧荣鑫 蔡勇 阿依木古丽
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 冷冻保存 前体脂肪细胞 绵羊 冷冻保护剂
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1439-1446
• 分类号: S852.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.024

摘要

[目的]探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度.[方法]在含20％胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液,对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后,检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量,测量GPDH活性,并用实时荧光定量PCR检测PPAR γ和LPL mRNA的表达水平,最后对复苏细胞进行染色体核型分析.[结果]各种冻存保护液中,10％DMSO和5％DMSO+5％ PVP组细胞存活率最高,与对照组相比差异不显著(P＞0.05),其它各试验组复苏细胞存活率均显著低于对照组(P＜ 0.05)；各试验组中10％ DMSO组细胞增殖能力最强,且与对照组相比差异不显著(P＞0.05)；细胞复苏后培养6d,各试验组脂肪沉积量与对照组之间没有显著差异(P＞0.05),而第11天时,10％ DMSO组脂肪沉积量显著高于其它试验组(P＜0.05),且与对照组相比差异不显著(P＞0.05)；各试验组GPDH活性和LPL、PPARγ mRNA的表达量与对照组之间没有显著差异(P＞0.05)；染色体核型分析发现,复苏细胞二倍体细胞占主体,与原代细胞没有显著差异(P＞0.05).[结论]含20％ FBS的DMEM/F12培养液中添加10％ DMSO或10％PVP、5％ DMSO+5％ PVP均能有效保存绵羊前体脂肪细胞,但以10％ DMSO最佳.