泛耐药基因NDM-1在大肠杆菌中的克隆表达及耐药性检测

• 作者: 刘威 尚伟 尹志涛 李雪莲 王雪松 袁静 邹大阳 魏晓 黄留玉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 新德里金属β内酰胺酶1 克隆表达 耐药性
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 662-664
• 分类号: Q78
• 字数: 2704字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.05.008

摘要

目的:构建bla(NDM-1)基因重组质粒,表达新德里金属β内酰胺酶1(NDM-1),并检测携带bla(NDM-1)基因重组质粒的大肠杆菌的耐药状况.方法:PCR扩增编码NDM-1的基因bla(NDM-1),构建表达载体pGEX4T-1-NDM-1,并转化至大肠杆菌,转化子经PCR后测序,以确认构建和转化成功;用Western印迹验证重组蛋白的表达;用药敏纸片法检测含重组质粒pGEX4T-1-NDM-1的大肠杆菌的耐药谱;用E-test法测定其最低抑菌浓度(MIC).结果:PCR及测序结果显示载体构建和转化成功;含重组质粒pGEX4T-1-NDM-1的大肠杆菌在37℃时,经1 mmol/L IPTG诱导5 h后,SDS-PAGE可见目的条带;除对替加环素和粘菌素敏感外,该重组子对多种碳青霉烯类抗生素耐药,E-test检测其对亚胺培南的MIC为64μg/mL.结论:构建了含泛耐药基因bla(NDM-1)的重组质粒,转入大肠杆菌后表达了融合蛋白,并对多种碳青霉烯类抗生素耐药.为进一步研究bla(NDM-1)基因和蛋白的功能奠定了基础.