携带猪传染性胃肠炎病毒S/N融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定

• 作者: 廖晓丹 张鑫淼 文心田 曹三杰 李春松 杨恒 黄小波
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 减毒沙门氏菌 猪传染性胃肠炎病毒 融合双基因 构建 生物学特性
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1273-1280
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5650字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础.采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2 kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N.将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207 (pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207 (pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定.结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207 (pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×10 9、1×10 9和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除.结果表明成功构建TGEV S/N双基因疫苗SL7207 (pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础.