应用引物原位标记技术快速检测SOX2基因

• 作者: 丁显平 权强 罗熙 陈林
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 原位杂交 引物原位标记 SOX2基因
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 289-292
• 分类号: R714.55
• 字数: 3297字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2012.03.009

摘要

目的 应用引物原位标记(primed in situ labeling,PRINS)代替荧光原位杂交技术对SOX2基因进行快速检测.方法 常规制备人外周血染色体并制片,利用SOX2基因特异性引物在染色体上原位扩增包含生物素标记的探针.用酪胺信号放大(tyramide signal amplification,TSA)生物素系统处理经标记的探针.最后用链霉亲和素-德克萨斯红(streptavidin-Texas red)对生物素信号进行荧光染色,用DAPI染料对染色体进行复染.作为对照,MCF-10F细胞用慢病毒载体转染导人SOX2基因,使用相同的方法检测结合位点.结果 VideoTesT-FISH软件分析提示,实验组3号染色体长臂端有特异红色荧光信号表达,空白组与未经TSA信号处理的对照组则无特异性的红色荧光信号.经过转染的MCF-10F细胞则表现出不同的SOX2基因整合效果.结论 PRINS技术利用高敏感度的原位PCR技术(in situ PCR)结合荧光标记的脱氧核苷酸可在细胞内原位合成形成探针,可大大减少探针的费用与检测的时间,提高检测效率.在诱导多能干细胞的鉴定与分类中具有较为广泛的应用前景.