AMPKα2基因shRNA重组质粒的构建以及在氯离子介导的大鼠心肌缺氧/复氧损伤中的作用

• 作者: 何明 刘丹 吴晓牧 周敏 孙惦 许旻
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AMP活化的蛋白激酶α2亚基 氯 缺氧/复氧损伤 细胞凋亡 氧化性应激
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2113-2118
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.12.001

摘要

目的:构建AMP活化的蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)基因shRNA重组表达质粒,转染H9c2心肌细胞,探讨其在氯离子(Cl-)介导的心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用.方法:构建靶向AMPKα2基因的shRNA重组质粒pSuper-AMPKα2 shRNA,转染H9c2细胞;Western blotting法测定AMPKα2的蛋白表达情况.实验分5组,每组重复6次:(1)Control组;(2)A/R组;(3)Cl--free A/R组;(4)pSuper+Cl--free A/R组;(5)pSuper-AMPKα2 shRNA+ Cl--free A/R组.处理结束后,生化自动分析仪测定LDH活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果:重组表达质粒pSuper-AMPKα2 shRNA经测序证明构建正确;转染心肌细胞后,AMPKα2蛋白表达明显下降;Cl--free A/R组较之A/R组细胞存活率升高,LDH含量下降,细胞凋亡减少,ROS生成减少,SOD和GSH-Px活性增加;转染pSuper-AMPKα2 shRNA质粒后,阻断了Cl--free液的保护作用,且ROS生成增加,SOD和GSH-Px活性也下降.结论:成功构建pSuper-AMPKα2 shRNA重组质粒.AMPKα2基因沉默阻断了Cl--free液对心肌细胞A/R损伤的保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何明	南昌大学医学院	66	320	11.0	14.0
2	吴晓牧	江西省人民医院神经内科	171	1029	15.0	24.0
3	刘丹	南昌大学医学院	68	339	11.0	15.0
4	周敏	南昌大学医学院	39	146	7.0	11.0
5	孙惦	南昌大学医学院	13	28	2.0	5.0
6	许旻	南昌大学医学院	5	16	1.0	4.0