根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌转化系统研究

• 作者: 叶建仁 张扬 张林平 李月阳 许剑涛 黄麟
• 来源期刊: 南京林业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 异角状拟盘多毛孢菌 根癌农杆菌 遗传转化 转化效率
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 28-32
• 分类号: S764
• 字数: 4542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2006.2012.01.006

摘要

以携带潮霉素B磷酸转移酶抗性基因(hph)的pBHt1作为转化载体,根癌农杆菌AGL -1作为转化介体,实施转化异角状拟盘多毛孢菌.研究发现,异角状拟盘多毛孢菌的最优转化体系为:异角状拟盘多毛孢菌分生孢子悬浮液浓度为1×106个/mL,根癌农杆菌OD600为0.3,共培养时间48 h,共培养温度为25℃,诱导培养基中乙酰丁香酮(AS)浓度为200 μmol/L,选择培养基添加250 μg/mL潮霉素B、250 μg/mL头孢噻肟钠.1×106个异角状拟盘多毛孢菌分生孢子可以产生200～300个转化子,随机挑选10个转化子进行PCR检测,均能扩增出预期条带,且在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定遗传,这表明T- DNA已经插入到异角状拟盘多毛孢菌的基因组中.此次建立的异角状拟盘多毛孢菌的转化体系可为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供有效的工具.