根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统的构建

• 作者: 任楠 李俊星 李德明 王坤 银超 陈凤
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 泡盛曲霉 根癌农杆菌介导转化(ATMT) 潮霉素抗性基因 米黑根毛霉脂肪酶(RML)
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 8800-8805
• 分类号: S567.2+9
• 字数: 4368字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2012.16.003

摘要

[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性.[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性.[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因( HygB1)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciens mediated transformation,ATMT),将带有HygB1的质粒pHGW - amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115_52,建立以HygB1为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系.利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS - PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达.[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊星	华南理工大学生物科学与工程学院	5	19	2.0	4.0
2	李德明	华南理工大学生物科学与工程学院	2	12	2.0	2.0
3	王坤	华南理工大学生物科学与工程学院	5	14	3.0	3.0
4	陈凤	华南理工大学生物科学与工程学院	2	8	2.0	2.0
5	任楠	华南理工大学生物科学与工程学院	3	16	2.0	3.0
6	银超	华南理工大学生物科学与工程学院	2	2	1.0	1.0