二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性

• 作者: 周丽君 孙远明 徐振林 王弘 王强 王欲晓 雷红涛 黄启欣
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药 单链抗体 噬菌体展示 广谱特异性
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 生物化学
• 页码范围: 2269-2274
• 分类号: O652
• 字数: 3812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7503/cjcu20120158

摘要

从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3 MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000；scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.