猪生长抑素Ⅱ型受体基因(SSTR2)shRNA的构建与筛选

• 作者: 习欠云 刘小龙 张永亮 徐鹏如 杨林 江青艳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: RNAi SSTR2 慢病毒载体 猪
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 382-388
• 分类号: S828.5
• 字数: 4670字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.04.006

摘要

生长激素(GH)是调控动物生长的重要激素,GH分泌水平的高低主要受正性调控因子生长激素释放因子(GRF)和负性调控因子生长抑素(SS)的双向调节.SS通过生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)发挥作用,减少GH的分泌水平.本研究设计了3条SSTR2的短发夹RNA(shRNA),构建猪(Sus scrofa)SSTR2真核表达质粒(pcDNA3.1(-)-SSTR2)和SSTR2慢病毒RNA干扰质粒(pshRN A-copG FP lentivector,LV-shRNA),并共转染中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢细胞系(CHO),通过对转染细胞的荧光观察、Real-time PCR和酶联免疫法(ELISA)检测,结果表明,CHO转染细胞中猪SSTR2 mRNA表达水平不同程度的抑制,分别为90.4％、28.3％和86.3％,(P＜0.05).其中,LV-shRNAl表现出最高的沉默效率:转染效率在80％左右时,猪SSTR2 mRNA水平沉默效率为90.4％,蛋白质水平降低了33.3％.本研究成功地筛选到了降低猪SSTR2基因表达的shRNA,为利用shRNA技术下调动物基因表达,构建转基因模型提供思路.