人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定

• 作者: 付远辉 何金生 张梅 赵秀玲
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人呼吸道合胞病毒 核蛋白 磷蛋白 转录延长/终止抑制因子M2-1 大蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 895-899
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.08.004

摘要

目的 构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况.方法 采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT.设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P.同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L.用重组质粒转染 BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达.结果 成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达.结论 获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张梅	安徽医科大学免疫学教研室	65	320	11.0	14.0
2	何金生	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	32	86	5.0	7.0
3	付远辉	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	14	29	4.0	4.0
4	赵秀玲	安徽医科大学免疫学教研室	1	0	0.0	0.0