适用于链霉菌大片段基因组DNA克隆和异源表达的细菌人工染色体(BAC)载体的构建及应用

• 作者: 何璟 周俊 李娜 黄胜
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 细菌人工染色体(BAC)载体 天然产物 生物合成基因簇 链霉菌 异源表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传的分子生物学
• 页码范围: 30-37
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

[目的]很多链霉菌来源的天然产物的生物合成基因簇往往很大,用传统的cosmid载体很难完整的克隆和异源表达.本研究通过载体改造,成功构建出一个新的细菌人工染色体(BAC)载体,用于链霉菌来源的天然产物生物合成基因簇的克隆及异源表达实验.[方法]从复合型载体pCUGIBAC1出发,通过λRED介导的PCR-targeting方法,用链霉素抗性基因替换掉原有的氯霉素抗性基因标记,同时插入链霉菌中常用的安普拉霉素抗性标记、转移起始位点oriT、(φ)C31整合酶基因int、整合位点attP等元件.[结果]成功构建出可装载链霉菌大片段DNA的BAC载体pMSBBACs.使用pMSBBACs构建出链霉菌U27的基因组BAC文库,平均插入片段大小为100 kb.选取其中一个大小为140 kb的BAC质粒进行功能验证,实验证明通过接合转移和原生质体转化的方法都能够将这个大型BAC质粒导入链霉菌模式菌株,并通过位点特异性重组整合到染色体中进行异源表达.[结论]BAC载体pMSBBACs可成功用于放线菌大片段基因组DNA的克隆和异源表达实验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周俊	华中农业大学农业微生物学国家重点实验室	9	112	5.0	9.0
2	李娜	华中农业大学农业微生物学国家重点实验室	15	86	6.0	9.0
3	何璟	华中农业大学农业微生物学国家重点实验室	17	106	6.0	9.0
4	黄胜	华中农业大学农业微生物学国家重点实验室	3	20	2.0	3.0