应用ICSI技术生产转基因水牛胚胎的初步研究

• 作者: 刘玉兵 孟凡丽 崔奎青 王丹 石德顺 陆凤花 陈自洪
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: ICSI 转基因 水牛
• 年，卷（期）: 2012,（15）
• 所属期刊栏目: 繁殖生理
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: S823.3
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在探讨水牛精子完整质膜和破损质膜的方法对水牛单精子注射(ICSI)技术转基因效果的影响.水牛精子经冻融、Triton ×-100、超声波3种方法破损精子质膜后与外源质粒DNA混合,采用ICSI的方法将基因转染后的精子注射到水牛体外成熟卵内,观察水牛ICSI卵激活后的发育状态和外源基因的表达效果.结果表明:精子质膜完整性实验中,冻融破损精子质膜组早期胚胎基因表达率为21.8％,显著高于活精子组的5.1％(P＜0.01);冻融组与活精子组的卵裂率、囊胚发育率均无显著差异(P＞0.05).以冻融、Triton ×-100、超声波3种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(16.7％)最高,显著高于Triton×-100组(P＜0.01).同时,冻融组的早期胚胎基因表达率亦显著高于Triton×-100组和超声断尾组(60.3％vs.31.7％ vs.18.2％,P＜0.01).上述结果说明,使用ICSI技术转外源基因可获得表达EGFP基因的水牛早期胚胎;冻融精子质膜破损法能有效破损精子质膜,有利于外源DNA与精子的结合,且提高转基因效率.