XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响

• 作者: 吴飞翔 张玮 李力 王琪
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢肿瘤 DNA结合蛋白质类 内切核酸酶类 核蛋白质类 转录因子 顺铂 抗药性,肿瘤 基因表达调控,肿瘤
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 286-291
• 分类号: R246.3
• 字数: 6160字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2012.04.010

摘要

目的 探讨XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响.方法 针对XPG mRNA的不同区域设计不同的小分子干扰RNA( siRNA)片段(共3个,包括siRNA-XPG-733、1279和3227),瞬时转染卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP细胞,实时荧光定量PCR技术检测瞬时转染后SKOV3/DDP细胞中XPG mRNA的表达；选择对XPG mRNA表达抑制率最高的siRNA-XPG干扰片段,构建短发夹状RNA(shRNA)-XPG重组表达载体,转染SKOV3/DDP细胞；采用氨基糖甙类抗生素G418筛选、蛋白印迹法鉴定,确认获得XPG基因表达下调的shRNA-XPG-SKOV3/DDP细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测shRNA-XPG-SKOV3/DDP细胞增殖情况和顺铂耐药性,采用流式细胞仪和高效液相色谱法分别检测其细胞周期比例和细胞内顺铂浓度,转染以内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) siRNA构建的shRNA-GAPDH重组表达载体的SKOV3/DDP细胞为阳性对照,转染以XPG无关序列构建的shRNA-NC重组表达载体的SKOV3/DDP细胞为阴性对照.结果 (1)实时荧光定量PCR技术检测显示,siRNA-XPG-733干扰片段转染后SKOV3/DDP细胞中XPG mRNA的表达水平最低,对XPG mRNA表达抑制率最高,达53.8％.构建shRNA-XPG-733重组表达载体,转染SKOV3/DDP细胞,获得shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞,该细胞中XPG蛋白表达明显下调.(2) MMT比色法检测显示,shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞的增殖速度明显低于阳性对照和阴性对照(P＜0.05).流式细胞仪检测显示,shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞的S+G2/M期细胞比例为34.0％,与阳性对照和阴性对照(分别为58.7％和51.3％)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).MMT比色法检测显示,shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50)为( 13.79 ±0.06) μg/ml,明显低于阳性对照和阴性对照[分别为(27.84±0.34)和(28.32 ±0.42)μg/ml],差异均有统计学意义(P＜0.05)；但经顺铂处理后,shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞内顺铂浓度为(0.026±0.005) μg/ml,与阳性对照和阴性对照[分别为(0.024±0.003)和(0.025±0.007) μg/ml]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞中XPG基因表达下调导致其细胞增殖减慢、对顺铂的耐药性下降.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	张玮	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	149	564	13.0	17.0
3	王琪	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	87	263	8.0	11.0
4	吴飞翔	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	65	277	10.0	13.0