博尔纳病病毒p24和p40基因星形胶质细胞特异表达重组质粒的构建

• 作者: 张亮 房亮 李文娟 谢鹏 邓婧 金戈 黄荣忠
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 博尔纳病病毒 核蛋白 磷蛋白 星形胶质细胞 质粒
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 分类号: R373.9
• 字数: 4005字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2012.01.001

摘要

目的 构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用.方法 用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连接至pCMvie-GFAP质粒中的GFAP启动子的下游,分别得到p24和p40重组质粒.用酶切、PCR以及测序3种方法鉴定重组质粒,并将质粒转染人胶质瘤细胞株(U251),采用免疫细胞化学方法检测目的蛋白表达.结果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带位置与预期相符,经测序可见插入序列正确,质粒转染U251细胞后,经免疫细胞化学检测到目的蛋白表达.结论 成功构建了pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形胶质细胞特异性表达质粒,为研究这两种病毒蛋白的致病机制及其对星形胶质细胞的影响提供了工具.