猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达

• 作者: 叶玲玲 周晓黎 徐维加 杨建明 段博芳 段纲 毛永杨 王琼 艾军 董俊
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猴B病毒 gB基因 杆状病毒表达载体 昆虫细胞
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 674-678
• 分类号: R373.1
• 字数: 3696字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.07.006

摘要

目的 研发猴B病毒ELlSA检测试剂盒中替代全病毒的抗原.方法 根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoR I特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB.结果 该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB.在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圊细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98 kDa.实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac- HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达.结论 研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础.