甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因功能的初步研究

• 作者: 曾明 李娜 梁昊宇 王斌 陈沁 魏华
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型副伤寒沙门氏菌 ompW 基因敲除 功能研究
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 6-11
• 分类号: R117
• 字数: 5329字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.01.002

摘要

目的 利用λRed重组系统敲除甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因构建突变株,并且制备相应的回复株,进而初步研究该基因的功能.方法 PCR扩增得到上、下游同源臂,与卡那霉素抗性基因片段共同构建打靶片段,将其浓缩后转化含λRed重组系统的甲型副伤寒沙门氏菌(50973株),经PCR鉴定后得到突变株；将重组酶表达质粒pACU184与ompW基因的调控区和编码区序列连接后电转入突变株中,双酶切鉴定得到相应的回复株；SDS-PAGE及Western blot鉴定野生株、突变株与回复株中OmpW蛋白的表达情况；生化鉴定野生株、突变株与回复株,并观察野生株与突变株生长曲线的差异；测定野生株、突变株与回复株活菌半数致死量( LD50),以此来观察ompW基因与细菌毒力的相关性.结果 在甲型副伤寒沙门氏菌50973株中成功敲除了ompW基因,并构建了相应回复株；野生株与回复株均可表达出OmpW蛋白,突变株没有出现该蛋白的表达；野生株、突变株与回复株生化鉴定结果均为甲型副伤寒沙门氏菌,且野生株和突变株生长无明显差异；三者LD50均不存在显著差异.结论 甲型副伤寒沙门氏菌的ompW基因与该菌致病毒力无相关性,但突变株的构建为后续研究该基因具体功能提供了基础.