深圳市手足口病重症感染性克隆的构建和分析

• 作者: 冼慧霞 张仁利 张海龙 杨洪 罗敏 陈惠玲
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 手足口病重症 感染性克隆 序列比对
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 827-829,845
• 分类号: R512.5
• 语种: 中文

摘要

目的 构建肠道病毒71型(EV71)的感染性克隆,为EV71致病机理的研究和药物的开发建立技术平台.方法 选取临床手足口重症儿童粪便样品,经荧光定量PCR检测为阳性,RT-PCR方法扩增出EV71全基因组,通过TA克隆的方法连接到TOPO-XL-PCR载体中,应用T7聚合酶系统将线性化的EV71 DNA序列体外转录成RNA,转染人横纹肌肉瘤细胞系RD-A细胞,病毒传代并观察病变,通过间接免疫荧光实验进一步鉴定,获得的感染性克隆进行全基因组测序和序列比对分析.结果 RT-PCR可以获得EV71全长约7.5 kb的DNA片段,体外转录并转染后3～5 d可观察到典型的肠道病毒致细胞病变,免疫荧光可看到特异标记,序列比对为C4a亚型的EV71病毒.结论 构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,在分子生物学水平上有利于深入研究EV71的致病机制和毒力基因、患者抗体的中和特性、疫苗和药物的效力评估与开发等.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张仁利		192	798	13.0	17.0
2	冼慧霞		24	166	6.0	12.0
3	杨洪		38	445	11.0	20.0
4	张海龙		42	304	9.0	16.0
5	罗敏		6	116	4.0	6.0
6	陈惠玲		2	9	1.0	2.0