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PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制
PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制
作者:
沈志强
王艳萍
祖立闯
董林
谢金文
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
PRRSV
N蛋白
ELISA试剂盒
摘要:
采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。
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文献信息
篇名
PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制
来源期刊
中国兽医学报
学科
农学
关键词
PRRSV
N蛋白
ELISA试剂盒
年,卷(期)
2012,(3)
所属期刊栏目
预防兽医学
研究方向
页码范围
355-360
页数
分类号
S852.65
字数
语种
中文
DOI
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作者信息
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单位
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王艳萍
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祖立闯
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研究主题发展历程
节点文献
PRRSV
N蛋白
ELISA试剂盒
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国兽医学报
主办单位:
吉林大学
出版周期:
月刊
ISSN:
1005-4545
CN:
22-1234/R
开本:
大16开
出版地:
长春市西安大路5333号
邮发代号:
12-105
创刊时间:
1981
语种:
chi
出版文献量(篇)
7291
总下载数(次)
8
总被引数(次)
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