转K2.9基因绒山羊体细胞核移植技术体系的优化研究

• 作者: 于永生 刘晓辉 张立春 朴庆林 潘晓燕 王晓阳 王正朝 金海国
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 绒山羊 毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因 胎儿成纤维细胞 转基因 体细胞核移植
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 2067-2075
• 分类号: Q813
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.10.020

摘要

[目的]利用体细胞核移植技术制备转毛角蛋白Ⅱ型中间丝K2.9基因的高绒质绒山羊胚胎,为绒山羊优良品种的培育提供一种全新的技术材料.[方法]以含有Neor基因标记的K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得转K2.9基因细胞,将获得的转基因阳性细胞与体外成熟的绒山羊卵母细胞进行核移植,并对生产的重构胚进行了体外培养.本文分别进行了激活方法、供体细胞和卵母细胞来源的筛选,且对获得的囊胚进行了PCR鉴定.[结果](1) Iono+6-D对成年羊卵母细胞的孤雌激活效果好于A23187+6-D,显著提高了胚胎的卵裂率.(2)羔羊孤雌胚的卵裂率显著低于成年羊,但囊胚率差异不显著.(3)来自2只绒山羊胎儿的转基因成纤维细胞对核移植胚的发育没有显著影响,但2号羊的转基因细胞显著提高了融合率.(4)以羔羊卵进行核移植,显著降低了核移植胚的发育率.(5)对获得的囊胚进行PCR鉴定,成功扩增到目的基因.[结论]将K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染的绒山羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,核移植到成年羊卵母细胞中,以Iono+6-D进行激活,首次成功、高效地获得携带K2.9基因的绒山羊囊胚.