红色荧光基因慢病毒转染人脑胶质瘤干细胞的实验研究

• 作者: 吴庭枫 周幽心 李斌 杜子威 苏作鹏 谢学顺 陈三送 陈桂林 陈金明 陈雄辉 韦永新
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胶质瘤干细胞 慢病毒 红色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 新技术新方法
• 页码范围: 737-740
• 分类号: R739.41
• 字数: 3655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2012.07.023

摘要

目的 建立体外稳定表达红色荧光蛋白(RFP)的人脑胶质瘤干细胞.方法 将含有RFP基因的慢病毒(RFP-lentivirus)转染体外培养的人脑胶质瘤干细胞SU2,荧光显微镜下观察红色荧光表达情况;流式细胞仪测定转染前SU2细胞、转染后RFP-SU2细胞传代培养20代后红色荧光转染率:动态观察RFP-SU2单细胞的分裂及克隆形成情况；免疫荧光染色检测RFP-SU2细胞CD133、nestin的表达.结果 RFP-SU2呈悬浮球状生长,RFP呈高表达.转染前SU2细胞的红色荧光转染率仅为1.5％,转染并克隆培养20代后RFP-SU2细胞红色荧光转染率达75％.RFP-SU2单细胞仍可增殖形成脑肿瘤干细胞球,具有自我更新和克隆增殖能力.免疫荧光染色检测显示RFP-SU2细胞中CD133、nestin表达阳性.结论 以RFP为生物标记物的人脑胶质瘤干细胞成功建立,可为将来人脑胶质瘤干细胞的深入研究提供理想的材料.